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1.内毒素专用超滤膜 脂多糖结构的内毒素在水溶液中团聚成胶团状缔合物，在膜分离过程中，胶团与膜接触时会影响其存在形式，其外缘亲水链如果与膜的亲合力很强，团聚分子会因糖链与膜之间过强的亲合力而分散，改变了团聚状态，因此，一般超滤膜截留的是在膜表面分散的单分子。 本项目发明的关键在于，调节膜材质，减小超滤膜对胶团外缘糖链的亲和力，使内毒素在膜表面仍呈团聚态，从而实现对团聚大分子的截留。膜材质及膜孔径的优选，使大孔径膜在实现去除热原的同时，不会对一般中药成分（如人参皂苷类成分等）造成明显影响。 内毒素专用超滤膜孔径为5-20万分子量，试验中测得内毒素去除率达90%以上，对中药成分（如三七或人参成分）无明显影响，；待测药液（内毒素浓度5-5000EU/ml），超滤后（可二级超滤）内毒素浓度在安全限度之内 2.内毒素在线监测仪 实验中偶然发现内毒素的粒径分布与内毒素浓度具有相关性，高浓度内毒素的粒径分布主要在200~500 nm之间；低浓度内毒素的粒径主要分布于10~20 nm和200~500 nm之间，因此本项目从内毒素存在的胶粒光学特征中获得启发，依据激光散射技术，研制符合注射剂生产中的内毒素检测的专属仪器，此仪器应以控制注射剂生产中内毒素污染为目标，其特征为在线、快速、高灵敏，且价格低廉，实现生产线中的内毒素在线监控。

2.1 新型内毒素检测仪的研制 2.1.1针对细菌内毒素团聚后的光学特征，使用高性能硬件，优化光路和散射光接收器，提高内毒素检测灵敏度，并匹配适于内毒素粒径分布的计算分析软件。进一步对检测器结构进行改造粒径检测仪酒精检测仪，适宜于在线检测，并设计预警软件，对生产线中实时取样的样品液中的细菌内毒素采用检测曲线控制，设定安全范围，从而实现在线检测、预警一体化的细菌内毒素检测仪器。 2.1.2内毒素检测仪装置结构 此新型的内毒素在线检测的内部构造包括：光源、光束处理单元、在线检测池、散射光接收器及相应的数据转换处理系统。 光源采用波长632.8nm的He-Ne激光器双光束，只选择颗粒真正产生的单散射信号部分，去除干扰信号，激光源在降低对样品热效应的同时，加大功率，并针对样品，选择合适的发射功率和波长，自动调节激光衰减； 对散射光接受器为光电二极管(APD)检测器，多角度多点接收，暗基数小，灵敏度高粒径检测仪，速度快，性能稳定，通过光电二极管将散射光信号接收并转换成电信号，并配有相应的电信号放大器。 数据处理器是对光强转化的电信号，经自相关运算得到相关曲线，再由相应的软件分析出平移扩散系数，最后经stoken-Einstein公式，计算出粒径分布。

2.1.3检测池在线性改造 目前粒径检测仪中所采用的检测池，均是针对样品离线检测而设计的,此检测池通过外加样品，将样品池放于检测器中进行检测，无法避免环境中微粒对检测结果的影响；在对不同样品测试时，还需要通过清洗粒径检测仪，更换药液，容易引起待检测样品之间的交叉污染，此检测池无法满足注射剂的在线检测的要求. 经过本项目组的试验考察，根据注射剂生产线特点，研制出适于注射剂生产线中在线检测的样品检测池，采用类似流动比色池的方法，与检测样品溶液直接连接，实现注射剂生产的在线监控.此检测池可以实线与生产线的同步连接、监控，根据注射剂品种设置采样点间隔，关闭进液口和出液口，使待检测溶液呈现静止状态，对注射剂内毒素污染状况进行监控. 2.1.4在线预警软件 根据内毒素粒径分布峰强度、粒径分布范围与内毒素浓度的相关性。分别检测不同细菌内毒素浓度粒径分布图，并制作各浓度标准图谱，在对注射剂进行生产线在线监控时，对实时监控的粒径分布图与内毒素超标图谱进行相似度计算，当相似度大于0.9时，触发预警开关. 对注射剂生产过程监控时，当细菌内毒素浓度超过注射液限度值时，粒径分布峰会发生明显变化，同时相似度曲线发生大幅波动，触发预警系统，从而关闭生产管路，及时发现污染，最大程度的保证已生产出成品的安全性，减少企业的经济损失。

2.1.5内毒素检测仪样机 本项目组研制出的内毒素检测仪是世界首台基于内毒素在溶液中存在状态，能实现在线检测的内毒素检测仪。测试过程在电脑控制下全自动完成，自动选择最佳测试参数（如通道数、延时时间等），工作稳定可靠，操作方便 ，测试速度快，每测一个样品只需2～5分钟甲醇报警器，可多次全自动连续测试，达到最佳的测试精度和重复性。 ①技术性能：在3min内可以完成样品取样、检测、结果输出，并通过预警曲线反映制剂中细菌内毒素的水平，其检测最低限达到0.25EU/ml，在注射用水（0.5EU/ml）及制剂的安全范围之内。 ②技术参数：仪器检测指标：1、粒子检测范围：1-1000nm 2、波长准确度：误差≤0.1° 3、细菌内毒素检测限：≤0. 25EU/ml 4、细菌内毒素浓度范围：0. 5-100EU/ml 5、重现性：重现性的典型误差均小于1% 6、样品检测周期：1-3分钟。 7、准确度：小于国际标准ISO13321允许误差范围； 8、仪器检测类型：固定比色池与连续检测的流动检测池在线监控指标：1、在线检测结果与离线检测结果的差异性低于5% 2、检测池流速可调，样品异常在6分种内完成报警 3、检测池体积：0.5-5ml 4、预警限度范围：与内毒素超标图谱相似度大于0.9或内毒素含量变化超过50%，自动预警软件 5、连续检测频度：次/5-10分钟，具体由实际生产条件确定。 ③技术水平：此仪器对细菌内毒的检测充分考虑了注射剂特别是中药注射剂的生产特点，这在国内外将是首次以检测细菌内毒素的粒径分布特征，检测周期低于3min，已经研制出的内毒素检测仪灵敏度达到目前注射用水内毒素含量限度指标（0.5EU/ml），超过制剂内毒素含量限度指标（1-10EU/ml）

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